Isolation and RAPD-PCR Characterization of New Entomopathogenic Nematode Strains From Palestine

Simple item page
dc.contributor.advisorDr. Kamel Adwan
dc.contributor.advisorDr. Nael Abu-Hasan
dc.contributor.advisorDr. Naim Iraki
dc.contributor.authorMichael Awad Michael Sansour
dc.date.accessioned2017-05-03T09:32:06Z
dc.date.available2017-05-03T09:32:06Z
dc.date.issued2000
dc.description.abstractIsolation and RAPD-PCR Characterization of New Entomopathogenic Nematode Strains from Palestine Abstract Entomopathogenic nematodes (EPNs) are being applied as biocontrol agents against soil-borne pests. Since they exhibit host specificity, and because of the need for improving their infectivity and tolerance to environmental conditions it is necessary to enlarge the number of available species and strains. As the number of isolated species and strains increases, there will be a great need for convenient and reliable .methods of identification, genotyping and classification. Two EPN strains (Bethlehem I 1 and Bethlehem22) were isolated by trapping with larvae of Galleria mellonella from the fields of Bethlehem district, Palestine. The novel strains were identified as Heierorhabditis indica based on the successful crossings with another H. indica strain (LN2). There were 66% successful crosses between each of the Bethlehem strains and LN2 strain, while the percentage of successful crosses between Bethlehem strains was 83%. The Bethlehem strains were more heat tolerance when compared with H. hacieriophora from temperate climatic region. The survival of the 1.1s of the local strains was about 80%, while that of the H. bacteriophora strain approached Zero, when incubated at 40°C for 4 hours. The infectivity of the local strains was higher than that of the H. hacteriophora strain tested. The LD50 values after 26 hours exposure to G. VIII mellonella larvae were 25 for Bethlehem 11, 55 for Bethlehem22, and 160 IJs for H. bacteriophora. The novel strains are the first EPN strains that are isolated from Palestine. Studies on these strains are useful for the purpose to control local pests such as Maladera matrida. The two local strains were examined for their genetic relatedness to one another and to other EPN strains by Randomly Amplified Polymorphic DNA markers (RAPD). Results obtained by using seven primers showed that DNA banding patterns from Bethlehem strains are at 96.42% similarity, which indicate that they are different strains. Also, results showed that these strains are different from another H. indica strain, isolated from India, where an average similarity of 58.66% was observed. Moreover, the results revealed low similarity between the H. indica strains on one hand, and another strain belonging to the steinernema genus. This difference is expected since they belong to different genera. The RAPD-PCR technique cannot identify newly isolated strain at the species level. This is mainly because of the fact that this technique may show sometimes that the level of similarity between two species may be the same between two strains of the same species. On the other hand, this technique could be used to differentiate between two unknown strains.en
dc.description.abstractتستخدم النيماتودا الممرضة للحشرات لمكافحة الآفات التي تسكن في التربة, بما أن هذه النيماتودا تظهر خاصية بينها وبني الحشرة وبسبب الحاجة لتحسين فعاليتها ومقاومتها للظروف البيئية فإنه من الضروري زيادة عدد العزلات والأنواع منها, مع ازدياد عدد الأصناف والعزلات تزداد الحاجة لطرق سهلة ومتعددة لتعريف وتصنيف هذه الكائنات. تم فصل عزلتين (Bethlehem11, Bethlehem22) من مناطق بيت لحم في فلسطين باستخدام طريقة الطعوم "trapping" لعثة الشمع. تم تعريف العزلتين الجديدتين Heterorhabditis اعتماداً على تهجين ناجح crossing مع العزلة LN2 للنوع H.indica كانت نسبة التهجين الناجح لكل من العزلتين الجديدتين 66% مع العزلة LN2 new paras. اظهرت كل من العزلتين مقاومة للحرارة أكثر من H.hocteriophora المعزولة من مناطق مناخية معتدلة, حيث وصلت نسبة صمود الطور المعدي "IJS" في درجة حرارة 40ْ لمدة اربع ساعات إلى حوالي 80% لكل من العزلتين الجديدتين, بينما اقتربت إلى الصفر نسبة صمود الطور المعدي للنوع H.bacteriophora, عندما مكث لنفس الفترة في نفس درجة الحرارة. كانت قدرة إحداث المرض ‘’Infectivity’’ لكل من العزلتين الجديدتين أعلى بالمقارنة مع H.bacteriophora حيث كانت مقادير الـ LD50 للعزلة Bethlehem11 25 نيماتودا وللعزلة Bethlehem 22 55 نيماتودا وذلك بالمقارنة مع160 نيماتودا من نوع H.hocteriophora وذلك عند كشف يرقات عث الشمع للنيماتودا لمدة 26 ساعة, العزلتان الجديدتان هما أول محاولة لعزل نيماتود تمت في فلسطين. يمكن دراسة هذه العزلتين بهدف ملاءمتها لمكافحة الآفة المحلية Maladera matrida. تم فحص التقارب الجيني بين العزلتين الجديدتين مقارنة مع عزلات بطريقة RAPD-PCR اظهرت نتائج هذه الطريقة ان التشابه بين العزلتين الجديدتين هو 96.42%. وهذا يدل على كونهما عزلتين منفصلتين. هذا وقد أظهرت الطريقة ان هاتين العزلتين تختلفان عن عزلة أخرى من نفس النوع (H.indica,LN2) حيث يصل معدل تشابه إلى 85.66%. بالاضافة إلى ذلك اظهر اختلافا نسبيا بين جميع H.indica المفحوصة من ناحية وعزلة من الفصيلة Steinernema من ناحية اخرى. يعتبر هذه الاختلاف طبيعيا لأن العلاقة بين المجموعتين هي بمستوى الفصيلة. طريقة ال RAPD- PCR لوحدها لا تكفي لتشخيص نوع أو عزلة جديدة غير معروفة. ويعود ذلك إلى الحقيقة ان هذه الطريقة يمكن احيانا ان تظهر مستوى التشابه القائم بين نوعين مختلفين بنفس مستوى التشابه القائم بين عزلتين من نفس النوع. من ناحية اخرى يمكننا استعمال هذه القائمة للتمييز بين عزلتين غير معروفتين.ar
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/20.500.11888/8428
dc.titleIsolation and RAPD-PCR Characterization of New Entomopathogenic Nematode Strains From Palestineen
dc.titleRAPD-PCRفصل عزلات جديدة من النيماتودات الممرضة للحشرات من فلسطين وتشخيصها بواسطةar
dc.typeThesis
Files
Original bundle
Now showing 1 - 1 of 1
Thumbnail Image
Name:
isolation_and_rapd-pcr_characterization_of_new_entomopathogenic_nematode_strains_from_palestine.pdf
Size:
2.34 MB
Format:
Adobe Portable Document Format
Description:
Download
Collections
Biology